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点jici数:42 发布时间:2020-07-21

xi涤zheshi实yan操作guo程中看似很简单但又zhi关重要的yi个buzhou,所以今天小杨结合技术人员的建议和指导来gei你们普及yi下zhe方面小知识。

sheng物shi剂的xi涤方法

1. 自动xi板机:每孔加入xi涤液350μl,注入与吸chu间隔60miao。xi板5ci。

2. 手工xi板:甩尽孔na液体,在洁净的吸水纸上pai干,每孔加xi涤液350μl,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩diaomeibiao板na的液体,在厚的吸水纸上pai干。xi板5ci。

sheng物shi剂实yan开始qian,各shi剂均应平hengzhishi温;shi剂或样品配制时,均需充分hun匀,并尽量避mian起泡。

1.加样:分别设空白孔、biao准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加biao准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样时jiang样品加于meibiao板底bu,尽量不触及孔壁,qingqing晃动hun匀。geimeibiao板覆膜,37℃fu育2小时。为保zheng实yan结果有xiao性,每ci实yanqing使用新的biao准品溶液。

 2.qi去液体,甩干,每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用qian15分钟na配制),meibiao板加上覆膜,37℃温育1小时。

3.qi去孔na液体,甩干,xi板 3ci,每ci浸泡1-2分钟,da约350μl /每孔,甩干并在吸水纸上qingpaijiang孔na液体pai干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用qian15分钟na配制)100μl,加上覆膜,37℃温育1小时。

5.qi去孔na液体,甩干,xi板5ci,方法同buzhou3。

6.每孔加底物溶液100μl,meibiao板加上覆膜37℃避光fu育15分钟左右(根据实际显kuang酌情suo短或延chang,但不可超guo30分钟。当biao准孔chu蟴hi飨蕴荻仁保纯芍罩?。

7.每孔加终止液50μl,终止反应,此时蓝se立转黄se。终止液的加入顺xu应尽量与底物液的加入顺xu相同。

8.立即用meibiao仪在450nm波chang测量各孔的光密度(OD值)。应提莂n蚩猰eibiao仪电源,预热仪qi,设zhi好检测程xu。

9.实yan完毕houjiang未用完的shi剂an规ding的保存温度放回冰箱保存zhi有xiao期结束。

 
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